Identifizierung und Charakterisierung von 7S K RNA-bindenden Proteinen
- Durch zwei experimentelle Ansätze wurden Proteine isoliert, die die humane 7S K RNA binden. Im ersten Ansatz wurde die Interaktion eines Teils der 7S K RNA mit Zellextrakt-Proteinen charakterisiert. Durch EMSAs mit Mutanten wurde die spezifische Bindung eines 40 kDa-Proteins belegt. Durch ein Chromatographieschema wurde dieses Protein aus Maus-Kernextrakt angereichert. Im zweiten Ansatz wurden cDNAs der Proteine SRp40 und SCAF4 als 7S K RNA-bindende Proteine durch ein RNA-Liganden-Screening aus einer cDNA-Bibliothek isoliert. Beide Proteine wurden rekombinant in E. coli exprimiert und deren Bindung an die 7S K RNA in EMSAs bestätigt. Ein polyklonales Antiserum wurde erzeugt, das in Zellextrakten spezifisch SCAF4 detektiert. In fraktionierten Kernextrakten wurde ein 27 S 7S K RNA nachgewiesen. Mit dem Antiserum konnte ausgeschlossen werden, daß SCAF4 einen Bestandteil ist. Dennoch zeigten Immunpräzipitationen, daß SCAF4 im Kernextrakt an die 7S K RNA assoziiert vorliegt.
Author: | Hendrik MittendorfGND |
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URN: | urn:nbn:de:hbz:294-4507 |
Referee: | Bernd-Joachim BeneckeGND, Michael HollmannORCiDGND, Martin FeigelGND |
Document Type: | Doctoral Thesis |
Language: | German |
Date of Publication (online): | 2003/03/18 |
Date of first Publication: | 2003/03/18 |
Publishing Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek |
Granting Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Fakultät für Chemie und Biochemie |
Date of final exam: | 2002/02/07 |
Creating Corporation: | Fakultät für Chemie und Biochemie |
GND-Keyword: | Proteine; Proteinbindung; Chromatographie; RNS / Ligand (Biochemie) / Sreening (Chemie) |
Institutes/Facilities: | Lehrstuhl für Biochemie I |
Dewey Decimal Classification: | Naturwissenschaften und Mathematik / Biowissenschaften, Biologie, Biochemie |
faculties: | Fakultät für Chemie und Biochemie |
Licence (German): | Keine Creative Commons Lizenz - es gelten der Veröffentlichungsvertrag und das deutsche Urheberrecht |