Überexpression und Aufreinigung von [FeFe]-Hydrogenasen im Expressionssystem \(\textit {Clostridium acetobutylicum}\) und funktionelle Untersuchung

  • Die [FeFe]-Hydrogenasen HydA1 aus Chlamydomonas reinhardtii und HydA\(\tiny {S.o.}\) aus Scenedesmus obliquus konnten mit hohen spezifischen Aktivitäten in Clostridium acetobutylicum heterolog exprimiert und effizient aufgereinigt werden. Die Anpassung der Codon Usage und die Exposition der StrepTagII-Sequenz führten zu einer hundertfachen Steigerung der Proteinausbeute (1mg \(\bullet\) 1\(_{-1}\)). Für HydA aus C. acetobutylicum konnte ein homologes Expressionssystem auf der Grundlage der genomischen Integration durch homologe Rekombination realisiert werden. Für HydA wurde eine neue, besonders hohe spezifische Aktivität für die Protonenreduktion gezeigt. EPR-spektroskopische Untersuchungen an den im Rahmen dieser Arbeit exprimierten [FeFe]-Hydrogenasen ergaben die für intakte H-Kluster erwarteten Spektren. Für HydA1 aus C. reinhardtii gelang zusätzlich die funktionale Immobilisierung auf der Goldoberfläche einer SEIRAS-Messzelle.

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Metadaten
Author:Gregory Friedrich Christian von AbendrothGND
URN:urn:nbn:de:hbz:294-19992
Referee:Thomas HappeORCiDGND, Franz NarberhausORCiDGND
Document Type:Doctoral Thesis
Language:German
Date of Publication (online):2007/08/14
Date of first Publication:2007/08/14
Publishing Institution:Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek
Granting Institution:Ruhr-Universität Bochum, Fakultät für Biologie und Biotechnologie
Date of final exam:2007/06/18
Creating Corporation:Fakultät für Biologie und Biotechnologie
Tag:Ausbeute; Verbesserung; Überexpression
GND-Keyword:Hydrogenasen; Chlamydomonas reinhardtii; Heterologe Genexpression; Clostridium; Proteine
Note:
Teile der Dissertation veröffentlicht in:
Homologous and heterologous overexpression in Clostridium acetobutylicum and characterization of purified clostridial and algal Fe-only hydrogenases with high specific activities / von Abendroth, G. [u.a.]
In: Applied and environmental microbiology, Bd. 71.2005, H. 5, S. 2777 - 2781
Institutes/Facilities:Lehrstuhl für Biochemie der Pflanzen, Arbeitsgruppe Photobiotechnologie
Dewey Decimal Classification:Naturwissenschaften und Mathematik / Biowissenschaften, Biologie, Biochemie
faculties:Fakultät für Biologie und Biotechnologie
Licence (German):License LogoKeine Creative Commons Lizenz - es gelten der Veröffentlichungsvertrag und das deutsche Urheberrecht

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