Etablierung zellulärer Testsysteme zur Untersuchung Kardiomyopathie-assoziierter \(\it RBM20\)-Mutationen in HL1- Zellen und murinen embryonalen Stammzellen (CM7/1) mittels CRISPR-Cas9

  • Es sind >80 krankheitsassoziierte Gene der DCM bekannt, u.a. das für einen alternativen Spleißfaktor codierende \(\it RBM20\). Der Einfluss der Aminosäurepositionen innerhalb der RS-Domäne auf die Kernlokalisation des \(\it RBM20\) wurde anhand von EYFP-Proteinchimären untersucht. \(\it RBM20\) wurde in HL1- und CM7/1-Zellen mittels spezifischer Cas9-codierender Vektoren modifiziert. Die relative Quantifizierung des \(\it RBM20\) und RBM20-\(\it Splicing\) Targets erfolgte mittels RT-qPCRs. Die Fehllokalisation Kardiomyopathie-assoziierter Varianten wurde bestätigt. Die hetero- und homozygoten HL1-Mutanten wiesen signifikant erniedrigte relative Expressionen des \(\it RBM20\), \(\it Ttn-N2B\) und wildtypischen \(\it Ryr2\) auf. Die CM7/1-Mutante zeigte eine signifikant höhere relative \(\it RBM20\)-mRNA-Expression. CM7/1-Zell-Karyotypanalysen zeigten chromosomale Anomalien. Die generierte \(\it compound\) heterozygote CM7/1-Mutante ist nicht als Testsystem geeignet. Eine Nutzung der homozygoten HL1-Mutante als Testsystem ist mit Limitierungen möglich.

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Metadaten
Author:Hans EbbinghausGND
URN:urn:nbn:de:hbz:294-84864
DOI:https://doi.org/10.13154/294-8486
Referee:Hendrik MiltingORCiDGND, Bernd StratmannORCiDGND
Document Type:Doctoral Thesis
Language:German
Date of Publication (online):2022/02/07
Date of first Publication:2022/02/07
Publishing Institution:Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek
Granting Institution:Ruhr-Universität Bochum, Medizinische Fakultät
Date of final exam:2021/12/14
Creating Corporation:Medizinische Fakultät
GND-Keyword:Herzmuskelkrankheit; RNS-Bindungsproteine; Kongestive Herzmuskelkrankheit; Chromosomenanomalie; Spleißfaktor
Institutes/Facilities:Herz- und Diabeteszentrum NRW, Klinik für Thorax- und Kardiovaskularchirurgie
Erich und Hanna Klessmann-Institut für kardiovaskuläre Forschung und Entwicklung
Dewey Decimal Classification:Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften / Medizin, Gesundheit
faculties:Medizinische Fakultät
Licence (German):License LogoCreative Commons - CC BY 4.0 - Namensnennung 4.0 International