Biochemische und biophysikalische Charakterisierung von G‐Protein‐gekoppelten Rezeptoren
- G‐Protein‐gekoppelte Rezeptoren dienen der Wahrnehmung von extrazellulären Reizen wie z.B. Licht oder kleinen organischen Molekülen. Im Fokus dieser Arbeit stehen der \(\beta_2\)AR und Melanopsin. Ziel war die Charakterisierung beider GPCRs hinsichtlich ihrer Aktivierung und G-Proteinbindung. Besonderes Interesse galt dabei Kinetik und Mechanismus der Ligandenbindung am \(\beta_2\)AR. Der \(\beta_2\)AR wurde erfolgreich in Sf9 Insektenzellen exprimiert und mittels Affinitätschromatographie isoliert. Fluoreszenzspektroskopische Experimente führten zur Postulierung einer neuen Ligandenbindestelle am \(\beta_2\)AR. Mittels FTIR-Spektroskopie wurde der Rezeptor bezüglich seiner Sekundärstruktur und des Detergenz/Protein-Verhältnisses analysiert. Die erfolgreiche Immobilisierung des \(\beta_2\)ARs auf einem Ge-Kristall erlaubte die Durchführung von ATR-FTIR-Spektroskopie in einem Durchflusssystem. Interaktionstests zeigten, dass der\(\beta_2\)AR als GEF für das monomere G\(\alpha_s\) fungiert und den Nukleotidaustausch von GDP zu GTP\(\gamma\)S beschleunigt.
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| Author: | Yvonne FretterGND |
|---|---|
| URN: | urn:nbn:de:hbz:294-51309 |
| Title Additional (English): | Biochemical and biophysical characterization of G protein‐coupled receptors |
| Referee: | Klaus GerwertORCiDGND, Stefan HerlitzeORCiDGND |
| Document Type: | Doctoral Thesis |
| Language: | German |
| Date of Publication (online): | 2017/01/21 |
| Date of first Publication: | 2017/01/21 |
| Publishing Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek |
| Granting Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Fakultät für Biologie und Biotechnologie |
| Date of final exam: | 2016/06/20 |
| Creating Corporation: | Fakultät für Biologie und Biotechnologie |
| GND-Keyword: | G-Protein gekoppelte Rezeptoren; Zellkultur; Fluoreszenzspektroskopie; FT-IR-Spektroskopie; Ligand (Biochemie) |
| Institutes/Facilities: | Lehrstuhl für Biophysik |
| Dewey Decimal Classification: | Naturwissenschaften und Mathematik / Biowissenschaften, Biologie, Biochemie |
| faculties: | Fakultät für Biologie und Biotechnologie |
| Licence (German): |  Keine Creative Commons Lizenz - es gelten der Veröffentlichungsvertrag und das deutsche Urheberrecht |
