Approaches toward chemoselective conjugation of polyketide synthases and \(\textit {in vivo}\) localization within \(\textit {Saccharopolyspora erythraea}\) filaments
- Diese Arbeit untersucht enzymatisch und biologisch funktionierende PKS. Informationen über die Struktur von PKS werden unter Verwendung von Proteinkonjugaten an DNA-Origami erhalten. Zu diesem Zweck wurden verschiedene DEBS3-Varianten mit verschiedenen Markierungen erstellt und auf enzymatische Aktivität getestet. Ein Weg zur Derivatisierung besteht darin, MCAT-Enzyme für die Transacylierung von PKS mit inaktiven AT-Domänen zu verwenden. Hier wurde ein geeigneter Ausdruck eines mäßig thermostabilen MCAT in Medium-Durchsatz-Format und ein Assay zum Screening durch enzymatische Aktivität auf Zelllysate optimiert. Kenntnisse über die Lokalisation von DEBS und das Timing der Expression innerhalb von S. erythraea Filamenten sind essentiell. Hier wurden verschiedene Methoden zur Protein-Fluoreszenzmarkierung, die von kleinen Molekülsystemen bis zu Antikörper-Immunfärbungs- und GFP-Fusionen reichen, untersucht, um DEBS3 in seinem natürlichen Produzenten nachzuverfolgen.
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| Author: | Danae Martinez FagundoGND |
|---|---|
| URN: | urn:nbn:de:hbz:294-54555 |
| Referee: | Frank SchulzORCiDGND, Raphael StollORCiDGND |
| Document Type: | Doctoral Thesis |
| Language: | English |
| Date of Publication (online): | 2017/11/03 |
| Date of first Publication: | 2017/11/03 |
| Publishing Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek |
| Granting Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Fakultät für Chemie und Biochemie |
| Date of final exam: | 2017/08/15 |
| Creating Corporation: | Fakultät für Chemie und Biochemie |
| GND-Keyword: | Polyketid-Synthasen; Saccharopolyspora erythraea; Filament; Derivatisierung; Enzymaktivität |
| Institutes/Facilities: | Max-Planck-Institut für molekulare Physiologie, Dortmund |
| Dewey Decimal Classification: | Naturwissenschaften und Mathematik / Chemie, Kristallographie, Mineralogie |
| faculties: | Fakultät für Chemie und Biochemie |
| Licence (German): |  Keine Creative Commons Lizenz - es gelten der Veröffentlichungsvertrag und das deutsche Urheberrecht |
