Untersuchungen zur DNA-Bindung der DNA-Methyltransferase aus Thermus aquaticus

  • Die Methyltransferase aus Thermus aquaticus katalysiert die Übertragung einer Methylgruppe vom Cofaktor SAM auf die exozyklische Aminogruppe des Adenins innerhalb der Sequenz 5´-TCGA-3´ in doppelsträngiger DNA. Die Sequenzspezifität von M·TaqI wurde mit Hilfe eines in vitro Spezifitätstests untersucht, der zeigte, daß M·TaqI, verglichen mit anderen Methyltransferasen, sehr spezifisch ist. Weiterhin wurde eine flexible Schleife nahe der DNA-Bindungstasche von M·TaqI untersucht (AS 110-120). Durch einen Alanin-Scan wurde ein für die Funktion des Enzyms wichtiger Tyrosinrest an Position 117 detektiert. Die Mutante Y117A zeigte eine verminderte Aktivität sowohl in vitro als auch in vivo. Mittels kompetitiver Titrationen wurde gezeigt, daß die Affinität der Mutante Y117A zur Sequenz 5´-TCGA-3´ geringer ist als die des Wildtyps zu dieser Sequenz. Abschließend wurde die Bewegung der Schleife während der DNA-Bindung mit einer Dansyl-markierten Mutante in Stopped-Flow-Experimenten untersucht.

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Metadaten
Author:Almut FriederichGND
URN:urn:nbn:de:hbz:294-2214
Referee:Matthias RögnerGND, Wolfgang HengstenbergGND
Document Type:Doctoral Thesis
Language:German
Date of Publication (online):2003/03/18
Date of first Publication:2003/03/18
Publishing Institution:Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek
Granting Institution:Ruhr-Universität Bochum, Fakultät für Biologie und Biotechnologie
Date of final exam:2001/04/02
Creating Corporation:Fakultät für Biologie und Biotechnologie
GND-Keyword:Substratspezifität; Fluoreszenzspektroskopie; Dansylgruppe; Strömungsmethode; DNS-Bindung
Institutes/Facilities:Max-Planck-Institut für molekulare Physiologie, Dortmund, Abteilung III , Physikalische Biochemie
Dewey Decimal Classification:Naturwissenschaften und Mathematik / Biowissenschaften, Biologie, Biochemie
faculties:Fakultät für Biologie und Biotechnologie
Licence (German):License LogoKeine Creative Commons Lizenz - es gelten der Veröffentlichungsvertrag und das deutsche Urheberrecht