Flavoproteins in directed evolution
- Two enzymes, an enoate reductase (YqjM) and a monooxygenase (\(P450_{BM3}\)), were successfully altered towards acceptance of new substrates applying directed evolution. Using iterative CASTing (combinatorial active site saturation test) highly regio- and stereoselective mutants were obtained in both cases. Additionally it was possible to control the regioselectivity (\(P450_{BM3}\)) and enantioselectivity (YqjM) of the catalyzed reaction. Moreover this work was used to shed more light on the iterative CASTing methodology and its application and the gained insights contribute to a more efficient application of the method.
- In der vorliegenden Arbeit wurden zwei Enzyme, eine Enoatreduktase (YqjM) und eine Monooxigenase (\(P450_{BM3}\)), mittels "Gerichteter Evolution" auf die Akzeptanz neuer Substrate angepasst. Mittel iterativem CASTing (combinatorial active site saturation test) konnten in beiden Fällen hoch regio- und stereoselektive Mutanten erhalten werden. Zusätzlich wurde Kontrolle über die Enantioselektivität (YqjM) und Regioselektivität (\(P450_{BM3}\)) erreicht. Ein weiterer Aspekt der Arbeit war die Untersuchung der Methodik und ihrer Anwendung. Das so erlangte Verständnis trägt dazu bei iteratives CASTing effizienter anzuwenden.
Author: | Sabrina KilleGND |
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URN: | urn:nbn:de:hbz:294-31066 |
Subtitle (English): | iterative CASTing to evolve YqjM and \(P450_{BM3}\) |
Referee: | Manfred T. ReetzGND, Martin FeigelGND |
Document Type: | Doctoral Thesis |
Language: | English |
Date of Publication (online): | 2011/06/03 |
Date of first Publication: | 2011/06/03 |
Publishing Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek |
Granting Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Fakultät für Chemie und Biochemie |
Date of final exam: | 2010/08/06 |
Creating Corporation: | Fakultät für Chemie und Biochemie |
GND-Keyword: | Enzym; Gerichtete Evolution; Reductasen; Steroide |
Institutes/Facilities: | Max-Planck-Institut für Kohlenforschung, Mülheim an der Ruhr |
Dewey Decimal Classification: | Naturwissenschaften und Mathematik / Biowissenschaften, Biologie, Biochemie |
faculties: | Fakultät für Chemie und Biochemie |
Licence (German): | Keine Creative Commons Lizenz - es gelten der Veröffentlichungsvertrag und das deutsche Urheberrecht |