New strategies to optimize the secretion capacity for heterologous proteins in \(\textit {Bacillus subtilis}\)
Neue Strategien zur Optimierung der Sekretionsleistung für heterologe Proteine in \(\textit {Bacillus subtilis}\)
- \(\textit {Bacillus subtilis}\) ist zwar in der Lage ist, große Mengen an homologen Proteinen zu sekretieren, doch sind die Ausbeuten an heterologen Proteinen oft nur gering. Ein limitierender Faktor für die Sekretion heterologer Proteine in \(\textit {B. subtilis}\) stellt die Wahl eines "falschen" Signalpeptides (SP) dar. Um dieses Sekretionshemmnis zu umgehen, wurde eine neue Strategie entwickelt, das sogenannte SP-Screening. Zunächst wurde ein Sekretionsreporter-System entwickelt, was auf der lipolytischen Aktivität des heterologen Enzyms Cutinase basiert. Ein "Pool" aller bisher bekannten SP aus \(\textit {B. subtilis}\) wurde erstellt, vor die Cutinase kloniert und auf Exporteffizienz getestet. Die gelungene Integration des Sekretionsreporter-Systems in einen automatisierten Hochdurchsatz-Screening- (HTS-) erlaubt die Anwendung einer Ein-Schritt-Optimierungsmethode; um das beste aller SP für die Sekretion eines beliebigen Zielproteins in einem einzigen Klonierungs- und Screeningverfahrens zu ermitteln.
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| Author: | Ulf BrockmeierGND |
|---|---|
| URN: | urn:nbn:de:hbz:294-16847 |
| Referee: | Karl-Erich JägerGND, Arnold J. M. DriessenGND |
| Document Type: | Doctoral Thesis |
| Language: | English |
| Date of Publication (online): | 2006/07/26 |
| Date of first Publication: | 2006/07/26 |
| Publishing Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Universitätsbibliothek |
| Granting Institution: | Ruhr-Universität Bochum, Fakultät für Biologie und Biotechnologie |
| Date of final exam: | 2006/07/06 |
| Creating Corporation: | Fakultät für Biologie und Biotechnologie |
| GND-Keyword: | Proteinsekretion; Gram-positive Bakterien; Sekretion / Effizienzsteigerung; Signal / Sequenz; Signalpeptide |
| Institutes/Facilities: | Institut für Molekulare Enzymtechnologie |
| Dewey Decimal Classification: | Naturwissenschaften und Mathematik / Biowissenschaften, Biologie, Biochemie |
| faculties: | Fakultät für Biologie und Biotechnologie |
| Licence (German): |  Keine Creative Commons Lizenz - es gelten der Veröffentlichungsvertrag und das deutsche Urheberrecht |
